PRECYM : Plate-forme Régionale de Cytométrie pour la Microbiologie
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Brèves
Atelier INSERM - Advances in cytometry : new applications and insights in basic and clinical research
mardi 12 mars

1-3 octobre 2013 ◘ 1 st -3 rd October 2013 Bordeaux, France Aims :

Recently, great technological improvements have been performed in multiparameter flow cytometry (MFC) to study complex biological systems. However, the difficulty of implementing MFC is a real barrier limiting its broad use. Similarly, knowledge is often lacking, in advanced analytical tools and methods needed to handle the mass of information generated by MFC. An emerging innovating technology, the multiparameter mass cytometry (MMC) allows the simultaneous analysis of more than 40 parameters. This new technology (also referred to as CyTOF) faces similar challenges in analysis and data visualization as MFC. Therefore, the formation into the laboratories is crucial to control all aspects of multiparametric approaches that will be addressed during this workshop. To fulfill these goals, MFC and MMC technologies will be introduced by experts of each experimental field and illustrated using concrete examples of applications in clinical research. These presentations will be completed by an introduction to current software solutions in order to analyze huge datasets generated by these two approaches. Finally, emerging technologies will be presented, mainly in the field of image cytometry. Audience All biological scientists, engineers, medical doctors, post-doctoral fellows and students who are interested in the application of advanced cytometry techniques in their respective experimental fields and are eager to increase the number of parameters studied simultaneously. A basic knowledge in conventional flow cytometry (4-6 parameters) is required. Lectures will be given in English.

Avec la participation de / with the participation of :
- Mario ROEDERER (Bethesda, USA),
- Francis LACOMBE (Bordeaux, France),
- J. Paul ROBINSON (Indiana, USA),
- Juan FLORES-MONTERO (Salamanca, Spain),
- Ryan R. BRINKMAN (British Columbia, Canada),
- Rodolphe THIEBAUT (Bordeaux, France),
- Andrea COSSARIZZA (Modena, Italy),
- Scott TANNER (Toronto, Canada),
- Jonathan IRISH (Nashville, USA),
- Samuel GRANJEAUD (Marseille, France),
- Garry NOLAN (Stanford, USA),
- Attila TARNOK (Leipzig, Germany),
- Philippe BOUSSO (Paris, France),
- Michael GERNER (Bethesda, USA),
- Marie FOLLO (Freiburg, Germany),
- William TELFORD (Bethesda, USA).



— Date limite d’inscription : 21 juin 2013  Registration deadline : June 21 st 2013
— Renseignements et inscriptions / Information and registration
— Inserm / Ateliers de formation / 101 rue de Tolbiac / 75654 Paris Cedex 13
— Tel. +33 (0) 1 44 23 62 04 or 62 03 / Fax +33 (0) 1 44 23 62 93 / ateliers@inserm.fr

 
Sur le Web : Atelier INSERM
L’Influx équipé du nouveau logiciel BD FACS Software et du système ACCUDROP
mardi 28 février

Grâce au soutien de BDB, l’Influx mariner de PRECYM vient d’être équipé du nouveau logiciel BD FACS Software. Ce nouveau logiciel, bien plus complet (et au combien convivial !) que l’ancien SPIGOT, apporte de nouvelles fonctionnalités qui devraient étendre le potentiel de l’INFLUX (comme par exemple le tri 6 voies).

De plus, le système ACCUDROP a également été installé afin de simplifier la procédure de calibrage de tri de l’instrument. Ce système, déjà disponibles sur l’ARIA, a pu être adapté sur l’infux. Un faisceau laser illumine les jets et permet de trouver le parfait "drop delay". Ingénieux et tellement plus pratique que le comptage des billes par microscopie.

 
Un projet de recherche sur la Dynamique du phytoplancton à l’échelle cellulaire et à haute fréquence
vendredi 29 octobre

L’objectif général du travail réalisé au sein de notre groupe de recherche est la caractérisation de la dynamique spatio-temporelle des assemblages microbiens, à travers un suivi à haute fréquence temporelle et à l’échelle individuelle.

La mise en évidence de groupes fonctionnels, c’est-à-dire réagissant aux forçages naturels ou anthropiques, est une étape majeure de ce travail. Des études in situ sont actuellement réalisées dans la baie de Marseille ainsi que dans l’Etang de Berre, deux zones soumises à une forte pression anthropique ainsi qu’à des forçages naturels importants comme par exemple le régime des vents (coups de Mistral ou vent d’Est).

Une approche automatisée est privilégiée par l’utilisation du cytomètre autonome immergeable Cytosub (www.cytobuoy.com). L’analyse automatisée des échantillons par l’instrument est couplée à une analyse automatisée des fichiers de données. Elle permet la discrimination des abondances des différents groupes définis d’après leurs profils optiques de diffusion de la lumière et de fluorescence (fluorescence naturelle produite par l’autofluorescence des pigments photosynthétiques du phytoplancton).

Un des aspects important du travail de thèse d’ A. Malkassian est le développement de méthodes d’analyse de données fonctionnelles* et de classification pour discriminer automatiquement (avec peu ou pas d’intervention humaine) les groupes d’intérêt. * Chaque individu analysé par l’instrument est défini selon cinq profils optiques, c’est-à-dire par cinq fonctions (pour plus de détail cliquez ici.

 
Test d’un cytomètre en flux embarquable lors de la Campagne ANR POTES Mer (mai 2007)
samedi 20 octobre

Marine Microbiology : North-Western Mediterranean Sea Cruise

Dr. G. Gregori (University of "La Mediterranee" : Laboratoire de Microbiologie , Geochimie et Ecologie Marine CNRS UMR 6117) took the A40-MiniFCM on board the research vessel TETHYS II (CNRS-INSU) during the "POTES mer" cruise. SYBR Green I for nucleic acid content and propidium iodide for cell membrane integrity (viability) along with light scatter characteristics were used to measure the abundance of marine bacteria at a variety of depths.

 
Sur le Web : Apogeeflow.com
INSTRUMENTS
Liste et détail des instruments de la plate-forme PRECYM

Le parc instrumental comprend :

- un cytomètre en flux analyseur-trieur MoFlo (Beckman-Coulter) ;
- un cytomètre en flux analyseur-trieur Influx Mariner (BD) ;
- un cytomètre en flux analyseur FACScalibur (BD) ;
- un cytomètre en flux analyseur ACCURI C6 (BD) ;
- un cytomètre en flux immergeable Cytosub (Cytobuoy) ;
- un cytomètre en flux équipé d’un module de prise d’image Cytosense (Cytobuoy) ;
- un microscope à épifluorescence Olympus B62 équipé d’une caméra CCD Retiga et d’un dispositif d’analyse d’images (Image Pro+ et ScopePRO).

Logiciels de cytométrie disponibles à PRECYM :
- Cell quest Pro (BD)
- Cytospec (PUCL)
- Cytoclus (Cytobuoy)
- Flowing Software (P. Terho)
- Flowjo (TreeStar)
- Spygot (BD)
- Summit (BC)
- WinLIST 6.0 (VSH)
- WinMDI (J. Trotter)

 
Articles publiés dans cette rubrique
samedi 1er octobre 2011
par gregori
Cytomètre Cytosense (Cytobuoy b.v.)
Description from the Manufacturer Cytobuoy b.v. (The Netherlands) :
Cytosense scanning flow cytometer
20 mW blue-green (488 nm) high quality laser module (other wavelengths or power available, flat light distribution for high flow rates
Volumetric, valveless, auto-ranging sample dosing system
Ultrawide (1x1mm ) flow cuvette with 2-stage hydrodynamic sheath fluid injection system, speed controlled, external & recirculating mode
3 detectors : one (1) forward scatter (photodiode) and two (2) photomultiplier tubes (PMT) for side scatter and/or fluorescence (selectable) ;
Scanning data (...)

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jeudi 30 septembre 2010
par gregori
Small Is Beautiful !
The figure below presents a cytogram of 50 nm (0.05 µm !) fluorospheres. This analysis has been performed on the PRECYM’s Influx mariner. The resolution of the beads has been performed on side scatter and fluorescence because there was no signal recorded on the forward scatter detector. With so small particles, and a blue excitation (488 nm) the wavelength of the photons is much larger than the particle diameter : then the light scatter follows the Rayleigh Theory, not the Mie anymore (photons are scattered in side directions more than in the forward (...)

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jeudi 30 septembre 2010
par gregori
Seawater analysis with the Influx mariner (BD)
Even though the Influx mariner (BD) is a jet in air flow cytometer, its conception makes it very sensitive. For instance, it can analyze phytoplankton with a very good resolution as illustrated by this Figure. The seawater has been collected in the North-Western Meditterranean Sea (nearby the Frioul Island, off the Marseille city ; depth : 15m). The sample is fixed with Glutaraldehyde (more suited than formaldehyde for phytoplankton as there is no trace of methanol in the commercial (...)

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mercredi 16 décembre 2009
par gregori
INFLUX mariner (3 lasers)
L’INFLUX Mariner de la plate-forme PRECYM est un cytomètre analyseur-trieur équipé de :
3 lasers (351, 488 et 561 nm)
7 détecteurs de fluorescences
Un module de polarisation
Un module de détection des petties particules
Un tube photomultiplicateur (PMT) sensible dans le proche Infra-rouge.
Un module de tri 4 voies
Lors d’essais préliminaires, des billes de 360 nm de diamètre (0,36 µm) ont été analysées avec l’INFLUX de la plate-forme. Les données sont présentées sous la forme de cytogrammes (...)

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mercredi 16 décembre 2009
par gregori
FACS calibur (4 couleurs)
Le FACSCalibur qui équipe la plate-forme PRECYM est un cytomètre en flux de paillasse (analyseur) équipé de :
2 sources lumineuses (488 et 633 nm)
4 détecteurs de fluorescences

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jeudi 22 décembre 2005
par Thyssen
Petite introduction du cytosub
CytoSub et cytométrie in situ : rêve ou réalité ?
Read it and tell me

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mercredi 12 janvier 2005
par gregori
Cytomètre en flux analyseur-trieur MoFlo (Beckman-Coulter)
Le MoFlo qui équipe la plate-forme PRECYM est conçu pour :
Analyser jusqu’à 100 000 particules par seconde,
Trier jusqu’à 70 000 particules par seconde,
Enregistrer jusqu’à 7 paramètres par particule :
5 paramètres de fluorescence dont :
3 fluorescences suite à l’excitation à 488 nm
1 fluorescence suite à l’excitation à 351 nm
1 fluorescence suite à l’excitation à 635 nm
Deux paramètres de diffusion de la lumière dont :
La diffusion aux petits angles relative à la taille des particules,
La diffusion à 90° relative à la structure interne des particules et à leur granularité,
Le (...)

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